瓷珠菌種(zhǒng)保存法

传统的菌種(zhǒng)保存方式简介

•   斜面(miàn)保存法少遠：微生物保存基本的方法，可广泛用于细菌、真菌等，保存期限非常短開就，斜面(miàn)容易干裂。

•   液体石道筆蜡保存法：可用于保存霉菌、酵母菌、放线菌及需氧菌，方法简便，可防止斜面開通(miàn)干燥和氧气進(jìn)入，但一些固氮菌、分枝杆菌、毛霉、厌氧兵術菌等不适宜用此法。

•   甘油冷冻保存法：用于老分一般细菌的保存，需使甘油终浓度为2裡學0%左右，然後(hòu)-20℃或-70℃以下保存。融化時(shí)需要水浴溶大北化。

•   真空冷冻保開鐘存法：具有低温、干燥、无氧的保存条件，适用于98%以上菌種(zhǒng)的保大器存，但操作复杂，一般实验室难以那家使用。

•   液氮保存法：基本所有微生物均可保存，并黑學且保存時(shí)间長(chá制見ng)，但操作较为复杂而且需要设备，不适用于一般匠拿实验室保存菌種(zhǒng)。

•   沙土保存法

•   半固体保存法

瓷珠菌種(zhǒng)保存法的原理

瓷珠菌種(zhǒng)保存管是理唱实验室保存菌種(zhǒng)的容器，管内有表面(miàn)凹孔小瓷珠用于细菌舞讀的吸附和保存，放置于-20℃或-80℃下有光便可创造干燥、低温、缺营养的环境，使菌株处于“休眠” 状态，方科就可長(cháng)期保存（视不同菌種(zhǒng)与東知保存温度，一般可保存3-10 年）, 同時(shí)菌種(zhǒng)保存管些微的取用和保存较为便利（取用复苏及保存菌種(zh鐵老ǒng)仅需1分钟）。

瓷珠菌種(zhǒng)保存管的优点

•      用途：服長菌種(zhǒng)保存、复苏和运输。

•      优点：操作简单方便、菌種水人(zhǒng)保存快速、包装物体积小、菌種(zhǒ舊明ng)保存時(shí)间長(cháng愛視)。

•     操公金作简单方便：挑取细菌新鲜纯培养物，接入菌種(zhǒn靜不g)保存管。

•     菌種什離(zhǒng)保存快速：混匀後(hòu)，吸出冷冻保存液。

•    &nb很他sp;包装物体积小：1.8ml冷冻管。

•   &什動nbsp; 菌種(zhǒng)保存時(shí錯門)间長(cháng)：2-8℃可保存信車6个月；-20℃可保存12个月；-80℃可保存24公事个月。

瓷珠菌種(zhǒng)保存管的使用方法

菌種(zhǒng)保存流程

1.从培养18h以上的平板上刮去新鲜纯培养店黃物于菌種(zhǒng)保存管中，配成(chéng)大约3-4麦氏比浊度的菌悬液機男。

2.拧紧保存管，来回颠倒几次使细菌乳化，不能(néng)旋摇。

3.用无菌移液器將(jiāng)菌種(zhǒng)保存管内的液体吸取干净，妥輛理善放置被(bèi)吸出的液体。

4.拧紧保存管，迅速將(jiāng)其置于-20℃男員或-70℃冰箱中。

使用時(shí)的注意事(shì)訊快项

•   被(bèi)保存的南器菌種(zhǒng)要求是經(jīng)過(guò)師藍纯化後(hòu)培养 18-24h 内的新鲜菌種(zhǒng)（鐘店细菌18-24h，酵母菌需3 天，形成(chéng)孢子的微弟麗生物保存孢子，而放线菌和丝状真菌需培养7 討唱天後(hòu)保存），不宜使用老化或未經(jīng)鉴定的菌種國看(zhǒng)。

•   菌種(zhǒng)林刀保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度，如接種(zhǒng)浓度過(guò)低將書金(jiāng)會(huì)降低复苏效果。

•   待保存于菌種(zhǒng)保存管中的菌種(z愛新hǒng)*乳化均匀吸附在多孔小瓷珠後(h著身òu)，要將(jiāng)多余的菌種(zhǒng)保存液吸取出来并弃之，否则在唱什复苏時(shí)的冻融過(guò)程中會(美說huì)损伤菌株活性。

•   做厌氧菌保存時(shí)，应提供厌氧的环境，如厌氧高遠箱、厌氧袋，菌種(zhǒng)保存管中可通入氮气来驱除保存菌種(zhǒng)會他時(shí)所引入的氧气。菌種(zhǒ笑要ng)复苏時(shí)，也要创造厌氧的环境。

•   菌種(zhǒng)复苏完成(chéng)後呢生(hòu)，對(duì)使用菌株需要進(j離錢ìn)行再次纯化，以保证菌株的单一性。

常见问题答疑

1、菌種(zhǒng)保存管能(néng)保存霉菌及酵母菌吗？

答：可以。對(duì)于霉菌等計事真菌需培养7 天進(jìn)行保存，而酵母菌需培养三天將(jiāng)些我孢子洗脱下来進(jìn)行保存，保存管中的小瓷理身珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂她刀土保存法中砂土作为载体起(qǐ)到(dào)的國費作用。

2、所有的菌都(dōu)能(néng)保存吗？如美那果不是的话，什麼(me)樣(yàng)的菌可以保存？什麼(me)小是樣(yàng)的菌不可以保存？

答：可以。菌種(zhǒng)保存的原理是预防或减缓DNA 复制時有區(shí)自發(fā)突变导致菌種(zhǒng)退化，動學因此要创造代谢不活泼的状态，而菌種(zhǒng)保存時(shí)使匠報菌種(zhǒng)進(jìn)入休眠光如态（孢子、芽孢)，并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创的銀造的环境越接近此状态，所保存的菌種(zhǒng)的時(shí)间就(jiù)讀離越長(cháng)，所以从原理上讲，所有菌種(zh快信ǒng)都(dōu)可用這(zhè)種(zhǒng)車放方法保存， 但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘們朋瑟氏菌）等特殊细菌保存時(shí)，需-80℃或更低議去温度保存，才可以做到(dào)更長(多術cháng)期的保存。

3、能(néng)用菌種(zhǒng兒多)保存管長(cháng)久保存菌株吗？

答：温度越低，保藏效果越好(hǎo)。从那靜目前的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1-5 年，-80℃或液氮校愛中可保存5-10 年，不同菌種(zhǒng)及不同去關的保存温度保存時(shí)间會(huì)來姐有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌個喝-20℃我们目前可以保存到(dào)6年）。但需要注意的是鄉雪所保存的菌種(zhǒng)需每年抽检進(jìn)行生化特征的到樹鉴定，确定菌株无变异。

4、菌種(zhǒng)保藏時(shí)为什麼(me)要進(輛報jìn)行分离纯化？

答：分离纯化後(hòu)才能(n自和éng)获得单一菌株，单一菌株又作進(jìn)行菌種(zhǒng)保藏才有意义，防止菌種(zhǒng)交叉鄉友污染和变异，這(zhè)也是菌種(zhǒng)保存的基本林喝原则。

5、菌種(zhǒng)保存管對(du技西ì)于平板来說(shuō)，對(duì)挑选菌落个数有要關制求吗？還(hái)是將(jiān藍白g)整个平板的菌落全部刮入管中？

答：對(duì)于要保存的细菌一般是要進(jìn)行2-3 次的纯化，要保習城证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的，所以在细男相菌保存的過(guò)程中，为了保证市下制备的菌悬液可以达到(dào)3術日-4MCF，是可以將(jiān謝木g)整个平板的的细菌全部刮到(dào)管中的，如果平板長(ch微離áng)的比较满一般半个平板就(jiù)够用，具体用量也根据照姐菌種(zhǒng)的不同有所差异，如霉菌、酵母菌在個技保存時(shí)，不适合用浊度法。

6、對(duì)于液体培养基培养的坐哥纯菌，是否也可以用咱们的菌種(zhǒng)保存管？如果可以的话，怎麼(me)操作？

答：是可以用的，如果液体培养基能(néng)保证是纯鐘費菌的话，可以直接离心，弃掉上清，然低章後(hòu)把保存管中液体吸進(jìn)去充分混匀，湖但然後(hòu)再转移到(dào)菌種(zhǒng)校妹保存管中，整个過(guò)程要注意无菌操作。不過(guò)，一般菌低火種(zhǒng)保存管选择平板菌落進(jìn)行保存，因为液体志子培养基中有杂菌是不易观察出来的。

7、为什麼(me)在菌種(zhǒng)朋什保存時(shí)，要上下颠倒？为什麼(m長開e)不能(néng)旋摇？

答：上下颠倒，可使菌悬液充分混匀，菌株充分、均匀地吸附到(dào)小東很瓷珠上，旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而會(huì)使菌株全部農道沉淀于管底。

8、为什麼(me)在使用時(shí)要將(jiāng)管内上子的液体尽可能(néng)多的吸出？

答：吸出液体可避免反复冻融形成(chéng)的冰晶對(duì)學去菌株的损伤，加快复苏的過(guò)程，因此，要尽可能(友慢néng)的將(jiāng)与菌種(zhǒng)混匀後(hò器飛u)的保存液吸净。而常用的甘油法，在复苏的過外國(guò)程中需用水浴锅快速溶解，在此過(gu劇我ò)程中，對(duì)菌株伤害较大。

9、在使用後(hòu)，菌種(zhǒng)保存頻北管的保存环境？需要-80℃冰箱吗？

答：本公司菌種(zhǒng)保存管采用的聽放是低温冷冻保存法，因此，使用後(hòu)，需放置低温环境，如去拍-20℃、-80℃或液氮中保存，而且温度越低，保存效果越好(照音hǎo)。用户需根据菌種(zhǒn到用g)的保存要求选择具体保存温度。

10、为什麼(me)說(shuō)，如果有条件計拍的话，菌種(zhǒng)保存管置于-80 冰箱或液氮中？

答：因为，贮存在-70℃以下低温中能(néng)减少冰晶形筆說成(chéng)，可极大降低冰晶形成(chéng)對(duì)细菌的伤近票害，同時(shí)可为被(bèi)保存的菌種(zhǒng)创造更低的代習唱谢环境，从而延長(cháng)细樂銀菌保存的時(shí)间。

11、为什麼(me)在取用菌株時(shí)，操兒化作過(guò)程要求快速？

答：菌種(zhǒng)保存复苏時畫的原则，要求慢冻快融，之所以要求快速，是就小因为在菌種(zhǒng)复苏的過(guò)程中, 長(cháng)醫放時(shí)间的溶解過(guò)程會(huì)對(duì)所保知還存的菌種(zhǒng)造成(chéng)损伤，而我们經(相歌jīng)過(guò)改良的保存方法很程度的避免复苏所子為造成(chéng)的影响，但我们還(hái)是建议遵循菌種(zhǒng)的保存爸不复苏原则，保证所复苏菌種(zhǒng)的复苏率。

12、將(jiāng)菌株反复冻存，到(dào)底對用雜(duì)菌株有什麼(me)影响？

答：低温會(huì)使菌株细胞内的水分形成(chéng)冰晶，从而引從場起(qǐ)细胞结构尤其是细胞膜的损頻筆伤。细胞体积大者一般要比较小者對(duì)低温更为信山敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到(dào)低温（不是一身術般冰箱）進(jìn)行冷冻時(sh雨秒í)，會(huì)产生冰晶，冰晶呈针状，极易导致细菌的严重损雪行伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量們少针尖樣(yàng)小孔，当从低温下移出并開(k火歌āi)始升温時(shí)，冰晶店紅又會(huì)变大，故反复冻存，志湖會(huì)對(duì)菌株造成(chéng)員路极大损伤。

13、为什麼(me)有時(shí)候菌種(z弟林hǒng)的保存效果不佳？

答：1、可能(néng)是由于保存後(hòu)未將(jiāng)保存遠鐘液吸尽，反复冻融形成(chéng)冰晶损伤菌株细很靜胞，影响了菌株活性。

2、确定所保存的菌種(zhǒng)是否为對(duì)数生長(cháng)到拍期的菌種(zhǒng)，我们建议普通菌種(zh腦線ǒng)保存为18小時(shí)内的新鲜菌種(zhǒng)，而霉菌需要待孢子麗要出现後(hòu)保存其孢子。

14、该产品能(néng)否用于菌種(zh站離ǒng)的运送，如果可以在什麼(me)条件商醫下运送？

答：就(jiù)目前试验数据而言，我们建议可主要用于聽哥普通细菌的短期运送，對(duì)于厌氧菌在运送時(s一討hí)让其处于厌氧环境下，2-8℃运送不超過(guò)5 天。另外空亮需要說(shuō)明的是如弧菌属和绿脓杆菌需要常温錢事运送，其對(duì)2-8℃温度极其敏感。